投稿分類 微生物

主委發表種類: 壁報

投稿標題(中): 某醫學中心以側流層析法(Lateral Flow Assays, LFA)檢測腦脊髓液中新型隱球菌(Cryptococcus neoformans)抗原偽陰性結果之分析與探討

投稿標題(英): Analysis of false-negative cerebral spinal fluid cryptococcal antigen lateral flow assay in a medical center

投稿摘要: 前言
病患主訴間歇性發燒與頭痛，半年前曾發現肺部結節，當時接受切除手術後病理顯示為結節性發炎併乾酪性壞死，結節經結核菌培養為陰性。對患者進行系列檢查後於腦部磁振造影發現細小結節，脊髓液常規檢查結果異常，但所有染色、培養、隱球菌抗原與filmarray檢查皆為陰性。臨床診斷為結核性腦膜炎，並開始投予抗結核藥物及類固醇治療。治療後腦脊髓液數據稍有進步，腦部磁振造影也顯示原有病灶縮小，但頭痛的症狀仍持續，也仍有低度發燒，持續讓患者以抗結核藥物治療。
兩個月後，患者除了仍持續發燒與頭痛外，開始出現意識恍惚、步態不穩的症狀，腦脊髓液常規檢查結果顯示惡化。此次腦脊髓液的染色與細菌及黴菌培養仍為陰性，但病毒培養CPE觀察時發現新型隱球菌(Cryptococcus neoformans)，因此診斷為隱球菌性腦膜炎並開始以amphotericin B + flucytosine治療，一週後病人退燒、頭痛逐漸緩解，患者在開始抗隱球菌治療1個半月後，所有症狀全部緩解。
方法
新型隱球菌常與免疫抑制患者引起機會性侵襲性真菌病有關。隱球菌通常被主要成分為多醣葡醣醛酸木甘露聚醣之莢膜包裹，它們亦是主要的毒力因子。新型隱球菌抗原 (CrAg) 的檢測對於確定新型隱球菌病非常重要。真菌培養雖是檢測新型隱球菌的參考方法，但從臨床標本中培養分離需要幾天時間，這可能會造成延遲診斷。目前臨床常規係對腦脊液檢體直接以印度墨水(India ink)染色顯微鏡檢查，但常由於靈敏度低而得到偽陰性結果。因此血清和腦脊液樣本中新型隱球菌抗原的檢測已成首選工具。目前常用的為側流層析法 (LFA)，主要係檢測新型隱球菌的莢膜葡醣醛酸甘露聚醣多醣成分。儘管CrAg LFA表現出色，但在本病例中我們發現CrAg LFA結果陰性的病人最後卻為隱球菌性腦膜炎。
結果
一般來說，儘管 CrAg LFA 具有高度敏感性和特異性，但由於真菌量過低、高抗原效價導致的後帶反應(postzone phenomenon) 或是菌株為莢膜缺陷型隱球菌等原因，可能會出現偽陰性結果。為排除後帶反應出現，我們將CSF檢體序列稀釋至1:2560倍結果仍為陰性，因此排除為抗原濃度過高之影響。經由次培養並增長培養時間(7~10天)後長出之細小菌落使用MALDI-TOF鑑定證實為新型隱球菌。持續以印度墨水染色觀察發現莢膜逐漸形成，最終染色結果呈現陽性。因此最後證實為莢膜缺陷型隱球菌感染，同時因菌量極少因此導致CrAg LFA檢測呈偽陰性結果。
討論
考慮到目前多數實驗室皆以CrAg LFA檢測為首要選擇，但因莢膜缺陷型隱球菌的出現，導致出現偽陰性結果，造成對疾病的延遲甚或錯誤診斷。因此實驗室人員和臨床醫生都應該注意此問題的重要性。

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